细胞培养瓶中的细胞不贴壁是什么原因

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　　贴壁细胞是目前细胞培养中的主要类型，它们需要吸附在支持物表面，依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、繁殖。有时候我们会发现细胞培养瓶中的细胞无法贴壁，这是什么原因引起的呢？

　　T225细胞培养瓶

　　贴壁细胞培养是适应环境的一种反应，密度大于培养基的细胞会沉降在底面上，如果细胞要生存必定得改善这个环境，分泌细胞外基质，改善底面结构，然后很自然就贴附在底面上了。密度小于水的细胞会漂浮在液面上，所以不可能贴在底面上，但是如果将培养液加满，使细胞能够与细胞培养方瓶上面的壁接触同样可以贴壁。如果细胞出现不贴壁的情况，可以从以下几个方面分析：

　　T175细胞培养瓶

　　1、细胞的传代最重要的是胰酶处理时间：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。

　　2、缺少贴壁因子：血清中含有促贴壁因子，而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子，细胞的贴壁效果会下降很多。

　　3、支原体或细菌的污染。

　　4、培养液配置、储存不当，如pH值过碱，Gln量太少等原因。

　　5、复苏的细胞本身状态不好，已经老化，失去贴附性。

　　6、接种细胞数目太少，无法分泌足够的细胞外基质。

　　7、复苏时处理速度太慢，复苏过程不当。