亲和力测定服务掌握elisa试剂盒试验技巧很重要

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　　亲和力测定服务掌握elisa试剂盒试验技巧很重要
　　elisa试剂盒实验经验是需要操作者们自身积累的，但是掌握了实验技巧之后可对实验的学习与操作事半功倍。E1ISA技巧学习很重要！下面一起来看看小编今天给大家带来了哪些实验技巧内容：
　　抗原抗体反应要求在适比例条件下进行，E1ISA反应试剂多，其工作浓度不同对结果影响较大，因此必须对包被抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)进行*工作浓度的滴定和选择，以达到*的测定条件。
　　(一)方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度：
　　用包被液将抗原作一系列稀释(1:50～1:800)后，按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照)，保温，洗涤。加工作浓度酶标抗体，洗涤，加底物显色，加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值；为0．8左右，阴性参考血清A值<0．1的包被抗原稀释度为工作浓度。
　　(二)方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度：
　　将抗体用包被液稀释为10mg/1、1mg/1、0.1mg/1三个浓度按行包被，每一个浓度包被三行(每行3孔)，elisa试剂盒分别在每个浓度包被的、二、三行中分别加入强阳性抗原，弱阳性抗原和阴性对照，将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:1 000、1:5000、1:10000三个浓度，分别加入每个浓度包被的、二、三列中。加底物显色，加酸终止反应，分别读取A值。以强阳性抗原液A值在0.8左右，阴性参考A值<0.1的条件为适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的*工作浓度。
　　抗体的稀释度包括特异性抗体，中间抗体及标记抗体。任何一种免疫组化方法要想得到令人满意的染色效果，必须将抗体进行*稀释。一般来说，抗体的稀释度取决于下列因素。
　　1.抗体的浓度(亦称滴度)
　　每毫升溶液内所含抗体分子越多，滴度就越高，该抗体可高度稀释，尤其是特异性一抗的稀释度。一般商品化抗体只知道每毫升含多少抗体蛋白量，不知道所含抗体分子。自己制备抗体可通过琼脂糖双扩散或放射免疫法进行测定。商品化抗体一般告知大约的稀释度，例如用PAP法可1：100～1：200稀释。但往往购买到一种新抗体后，需要利用组织切片进行*稀释度的测定。
　　2.抗体的配制
　　抗体的配制及使用是开展免疫组织化学工作的一个重要环节，其检测的结果既要可靠，又要能重复，这就要求实验人员在配制抗体过程中要注意其度。目前，随着抗体稀释液的稳定性提高，一次稀释抗体可用一年。当然，还可以购买到商品化即用型一抗，使用非常方便。
　　3.抗体稀释液的种类
　　可根据需要选择不同的抗体稀释液。如稀释当天用完的一抗，用0.05m01/1(pH7.6)TBS即可。如需长期保存，可用如下稀释液：取0.1g明胶(或绿色明胶)溶在100m10.05m01/1(pH7.6)TBS缓冲液中，边搅拌边加热至60℃，待完全溶解后，冷却至室温，加入1g牛血清白蛋白，后加入200mg aN3，分装保存在一40℃中备用。另外，抗体原液应分装后一40℃保存，可保存5年以上。
　　elisa试剂盒应保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。