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发表于 2022-11-12 19:12:40
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来自 中国–广西–柳州
关于血清灭活的问题由来已久。热灭活目的是祛除血清中补体等对热敏感的物质。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。很多同学找到我们,国内抗体药物生产公司询问血清到底要不要灭活、如何灭活的问题。
一、血清灭活指的是什么
一般情况下,血清的灭活就是将解冻后的血清,通过水浴加热的方式来处理,达到灭活补体的目的,温度和时间控制在如下范围:
56℃加热30分钟或40℃加热20分钟
因此,买到手的血清究竟要不要灭活,主要考虑血清中的补体对于细胞培养以及后续实验是否产生影响。所以就来简单讲讲,补体与细胞培养的关系。
二、补体对细胞培养的影响
补体是一种血清蛋白质,存在于人和脊椎动物血清及组织液中,不耐热,可组成庞大的补体系统,可介导免疫应答和炎症反应。激活的补体参与溶解细胞过程,刺激平滑肌收缩、细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。
因此,如果你的实验涉及以下这些情况时,建议去除血清可能带来的补体系统的干扰。
1免疫学研究
2诱导胚胎干细胞分化
3利用昆虫细胞研究病毒感染
4培养平滑肌细胞
5其他补体参与的细胞培养过程
血清的最佳工作温度一般是在37℃左右,所以热灭火对于血清而言,也是一种不小的伤害,会导致一些营养成分流失,进而影响细胞状态。
那么,市面上的血清都含有补体吗?都需要进行热灭活吗?随着研究的深入,网上也有一些人表示,胎牛血清无需热灭活,这究竟是真是假?接下来就给大家揭示其中奥秘。
三、血清灭活疑云
首先我们要明晰一点,按照牛发育情况,大体上,血清可以分为胎牛血清、新生牛血清、小牛血清和成牛血清。
其中,正规的胎牛血清,要求对5-8月胎龄(一般牛在10个月左右足月,后自然分娩)的胎牛采用心脏穿刺的方法采血,随后进行其他制备步骤,得到胎牛血清。因此:
靠谱的胎牛血清
没有形成一个完整的补体系统,不会真正地干预免疫!
所以,网传的正规胎牛血清无需热灭活的说法,是正确的,正常使用即可。
四、特殊情况
但有一点需要注意,如果你的实验涉及到一些其他特殊的神秘活性物质,必须要灭活,根据血清厂家多年来总结的经验,常规解冻后,40℃水浴加热20分钟即可,能够最大程度地保留营养成分。 |
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