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实验室工作中,经常会需要用到纯化的DNA,这时我们通常需要使用一个商业的DNA提取试剂盒对目的DNA进行分离纯化。市面上有很多类型的提取试剂盒,当使用不太熟悉的样本类型时,选择合适的盒子是尤为关键的,质粒DNA本文将分享考虑建议以供选择参考。
目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤: 裂解,柱纯化,洗涤杂质,柱洗脱。然而,不同的盒子在完成每个步骤的方式上有很大的不同。
二、使用的样本类型
不同的DNA来源有不同的试剂盒,从实验室培养的细胞,到临床样本,土壤样本,甚至指纹,也有许多专门用于某些应用的试剂盒。例如,土壤中的腐殖酸或血液中的血红蛋白会污染纯化的DNA,从而干扰下游的DNA实验(如PCR)。当然,也有一些试剂盒会在进行纯化步骤之前专门去除这些组分。如果想从PCR或琼脂糖凝胶中纯化DNA,有许多方法可以提高琼脂糖凝胶纯化的回收率。
三、基因组 VS 质粒DNA提取
一般来说,质粒DNA分离要比基因组DNA分离温和。这是因为针对质粒DNA的裂解步骤需要染色体DNA与细胞蛋白片段保持结合,以防止其污染最终的样品。两种类型的DNA回收都有试剂盒,甚至有可以同时纯化基因组DNA和总RNA的试剂盒。
四、细胞系 VS 生物体
在选择DNA提取试剂盒时,最重要的变量可能是你所使用的生物体。
1. 细菌:许多试剂盒都有用于细菌DNA分离的不同成分,这些试剂盒之间的主要区别在于细胞是如何被分解的,因为有些细菌比其他细菌更更有挑战性。例如,形成生物膜的细菌可能比传统的基于去垢剂的方法需要更强的裂解技术。
2. 动物组织:用于动物组织DNA分离的试剂盒通常具有更温和的裂解技术,因为大多数动物细胞不像细菌细胞那样有细胞壁。然而,动物组织DNA提取的挑战往往在于选择合适的组织匀浆方法。此外,许多动物DNA纯化试剂盒不使用苯酚/氯仿萃取或乙醇作为沉淀步骤,以减少破坏DNA的风险。
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