ELISA在生物大分子药物制剂分析上的作用

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　　抗体药物研发流程图ELISA的基本原理有3条：
　　（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；
　　（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；
　　（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
　　由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此ELISA法是一种既敏感又特异的方法。
　　ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。酶免疫试验（EIA）结合光学显微镜或电子显微镜可进行抗原定位与结构的研究，用酶标记抗原或抗体结合免疫扩散及免疫电泳可提高试验的敏感性。在实际应用方面可作疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查、法医检查、兽医及农业上的植物病害的诊断检定等。因此，它和生物化学、免疫学、微生物学、药理学、流行病学及传染病学等方面密切相关。
　　ELISA试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以用于大分子药物制剂分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。免疫学方法的缺点是不能同时测定代谢物，具有抗原决定簇的代谢片段可能会增加实验结果误差；不同来源的抗体与相同的蛋白多肽反应可能有较大的差别；可能受到内源性物质的干扰。当免疫分析法与其他分离技术联用时可以解决某一缺点，用LC法结合RIA技术对胰高血糖激素类似肽(GLP)-2的体内外代谢物进行了分离及鉴定，解决了单独用RIA法导致的交叉免疫反应。