生物药物研发服务鸟氨酸转氨酶(δ-OAT)试剂盒微量法​测定​说明

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　　测定原理:
　　鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和NADH作用下发生氨基转移反应生成吡咯啉-5-羧酸（P5C），同时产生NAD，通过检测340nm处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。
　　注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
　　测定操作:
　　1. 酶标仪预热30min，调节波长至340nm。
　　2. 将配好的试剂二、三、四37℃预热5min。（注意：粉剂试剂需要自行配制）
　　3. 取96孔板，依次加入60μL试剂二，60μL试剂三，60μL试剂四，20μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处初始吸光值和37℃反应10min的吸光值A2，△A=A1-A2。
　　4. 计算公式
　　用96孔板测定的计算公式如下
　　（1）按照样本蛋白浓度计算
　　酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
　　δ-OAT（nmol/min /mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
　　=321.54×ΔA÷Cpr
　　（2）按照样本质量计算
　　酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
　　δ-OAT（nmol/min /g 鲜重）=ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T
　　=321.54×ΔA÷W
　　（3）按照细胞数量计算
　　酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
　　δ-OAT（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T
　　=321.54×ΔA÷细胞数量
　　（4）按照液体体积计算
　　酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
　　δ-OAT（nmol/min /mL）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷V样÷T
　　=321.54×ΔA
　　V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
　　测定意义:
　　脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同，分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。鸟氨酸转氨酶( δ-OAT) 是 是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶，对植物适应逆境胁迫起关键作用。