找回密码
 立即注册

QQ登录

只需一步,快速开始

查看: 177|回复: 0

[软文] 通过疏水作用结合到硝酸纤维素膜上,而不是通过共价结合

[复制链接]
发表于 2021-12-17 16:57:28 | 显示全部楼层 |阅读模式 来自 广西柳州市柳北区
  而且,探针中出现的载体序列可以和这些标准物杂交。同时,另一个优点是在放射自显影图上标记带产生的信号可以被直接用来测量感兴趣的RNA的大小。

  DNA标准物不能在含有甲醛的凝胶中用作标准参照物,因为在这样的胶中,RNA比同样大小的DNA迁移速率快(Wicks 1986)。

  ●硝酸纤维素膜在待测的RNA样本中高丰度的rRNA (28S 和18S)。这些RNA的大小在不同的哺乳动物品种中变化很小。18S rRNA 的大小范围在1.8——2.0kb,28S 的范围在4.6——5.3kb。

  ●示踪染料。在大部分的变性琼脂糖凝胶电泳系统中,溴酚蓝迁移速率比5S rRNA稍快,而二甲苯腈蓝的迁移比18S rRNA稍慢。

  G用作Northern杂交的膜将电泳分离开的DNA和RNA从凝胶中转移到二维固相支持物上是Northerm杂交中关键的一步。起初,将RNA固定在活化的纤维素纸上进行杂交。

  不久后发现,用乙二醛、甲醛和氢氧化甲基汞变性的RNA像变性的DNA那样可以和硝酸纤维素膜牢固结合(Thomas 1980,1983)。

  几年后,硝酸纤维素膜成了Northern杂交的首选支持物。不过,硝酸纤维素膜不是理想的固相杂交支持物,因为它结合核酸的能力比较低(约50—— 100μg/cm2),并且随RNA的大小而变化。

  此外,RNA 通过疏水作用结合到硝酸纤维素膜上,而不是通过共价结合。因此,在高温下杂交和冲洗的过程中,其容易从固相支持物上慢慢地洗掉。

发帖求助前要善用【论坛搜索】功能,那里可能会有你要找的答案;

如何回报帮助你解决问题的坛友,好办法就是点击帖子下方的评分按钮给对方加【金币】不会扣除自己的积分,做一个热心并受欢迎的人!

回复

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则 需要先绑定手机号

关闭

站长推荐上一条 /1 下一条

QQ|侵权投诉|广告报价|手机版|小黑屋|西部数码代理|飘仙建站论坛 ( 豫ICP备2022021143号-1 )

GMT+8, 2024-3-28 16:32 , Processed in 0.039803 second(s), 10 queries , Redis On.

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表