抗体发现利器！兔源单克隆抗体的开发与人源化

ningxueqin

　　兔B细胞库的发育与其他哺乳动物有显著不同。 新生兔B细胞在妊娠第二周和第三周之间开始发育，而成年兔骨髓中的B淋巴细胞生成非常有限，表明 B淋巴细胞生成主要局限在早期发育过程中。

　　然而，在成人脾脏中发现了具有种系抗体序列的B细胞。此外，在兔对兔过继转移模型中，研究表明， 兔B细胞能够并入到宿主干细胞微环境中。

　　抗体人源化这表明：兔B细胞长寿且具有潜在的自我更新能力，因此可以在兔的整个生命周期内维持抗体库。

　　兔主要先重排重链，再重排轻链，与Ehlich等人提出的初级B细胞发育途径一致。简言之，该模型提出重链的VH–D–JH重组，然后作为前B细胞受体表达。刺激前B细胞受体后，VL–JL轻链重组就开始了。在1日龄兔子的Vκ–Jκ重排中观察到一些非模板核苷酸加成（也称为N-核苷酸）的现象，表明末端脱氧核苷酸转移酶最近表达过。

　　尽管有200个VH基因可能用于重链重排，但 其中大多数很少表达或不表达。有10-20个D基因和4-5个J H基因。然而，已知这些簇中的某些基因被优先利用：VH1是最接近D的VH基因，存在于80–90%的重链基因重排中。已知三种不同的同种异型VHa1、VHa2和VHa3，会导致VHa阳性血清型。其余10-20%的重链含有VHx、VHy或VHz基因。这一发现有些令人惊讶，因为有另一个功能性的D-近端VH序列明显更接近VH1片段。事实上，可以证明VH1阴性Alicia品系兔80–90%的重链重排中使用了VH4片段。然而，这种重链重排在成年兔子中非常罕见，这表明VH4重排在大多数情况下是无效的，因此会在发育过程中丢失。

　　人们认为，在重组过程中，兔子通过在VH–D和D–JH连接处添加N-核苷酸，部分抵消了某些VH、D和JH基因的优先利用，重链的第三个互补决定区（CDR）被称为HCDR3，它包括两个连接，因此是六个CDR中可变性最强的，与小鼠和人类HCDR3的平均±s.d.长度分别为11±2（mode=10个氨基酸）和15±4（mod e=15个氨基酸，这些发现证实，与小鼠HCDR3相比，兔HCDR3与人HCDR3具有更多的相似性。