细胞培养之“支原体”到底是个啥

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　　细胞培养基过滤：可以用5-10倍于常用量的冲击法，加入高浓度抗生素后作用24-48小时，再换入常规培养液，有时可能有效。推荐用量：庆大霉素 200ug/ml ,四环素10ug/ml ，卡那霉素50ug/ml 。对于支原体污染抗生素应用，预防性应用比污染后使用好。

　　2 . 加温除菌：根据支原体耐热性能差的特点。将受支原体污染的细胞置于41度中作用5-10小时可以杀灭支原体。但由于41度对培养细胞本身也有较大的影响，故处理前，应先进行预试验，确定出最大限度杀伤支原体而对细胞影响较小的处理时间。

　　3.裸鼠过继法：将支原体污染的细胞用0,25%胰酶,0.02%EDTA消化制成单细胞悬液后用PBS洗涤离心2次,调细胞密度至10^7 /ml;经小鼠背部皮下接种0.2ml细胞约10——15天后即可形成移植瘤;3——4周后无菌条件下取出移植瘤组织,剔除坏死部分,用注射器针芯在200目筛下将组织压碎使细胞释放入含0.1%EDTA的无血清DMEM培养液中:将细胞悬液小心加入含有淋巴细胞分离液离心管上层,室温下水平离心 3000r/min,20min;用吸管吸出两种液体界面层的细胞，置无血清DMEM培养液中,再用无血清DMEM将细胞洗涤离心1次,用完全培养液调细胞密度至5×105个/ml,置37℃,5%CO2培养箱中培养。