印迹法的基本原理

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　　(一)印迹法概念

　　1．探针 用化学方法将有识别能力的物质(如抗原、激素、核酸等)和酶(如辣根过氧化物酶)或核素(如3H、35S、32P)，或荧光物质(如异硫氰荧光素、地高辛等)结合成的复合物称作探针。

　　2．固相载体 即用于吸附生命大分子物质的固体材料。这类材料有硝酸纤维素(nitrocellulose，NC)膜，尼龙膜(nylon- membranes，NDM)，重氮苄氧甲基(yloxymethyl，DBM)膜和重氮苄硫醚(diazophenylthiaether，DPT)纸等。最常用的是孔径为0．45／lm的NC膜，因为它成本低廉，结合力强，背景较清晰。而对于检测核酸和酸性蛋白质来说，理想载体是带正电的尼龙膜，它与负电荷物质结合力很强，操作亦简单。但因

　　为其与负离子型染料也易结合，背景值高，故使用受到一些限制。

　　3．封阻 用一种与待测物不反应的物质(如蛋白质、核酸、吐温20等)封阻载体印迹区域以外的剩余吸附位点，使探针与印迹物反应，且不吸附到载体上，此过程称为封阻，从而使印迹结果背景干净，印迹的斑点或谱带更为清晰。

　　4．印迹 把经过凝胶电泳后的组分，通过吸附或电泳方法转移或者以直接点样方式吸附到固相载体上，此过程称电泳印迹，或称点印迹。

　　5．放射自显影 将含放射性核素的复合物置X线感光胶片上压片，当放射性核素电离辐射时，胶片上会发生化学“感光”作用，随后经显影，定影，即可呈现出斑点或谱带，此法较灵敏。