如果在DNA转移前凝胶未充分变性，烘烤中硝酸纤维素膜会变成黄色

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　　将膜从6X SsC中取出并使多余的液体流净。硝酸纤维素膜将膜放在纸巾上室温下晾干至少30 min。

　　ii.将膜夹在两张干燥的吸水纸中间。在80'C真空炉中烘烤30 min——2 h。过度烘烤将导致硝酸纤维素膜变脆。如果在DNA转移前凝胶未充分变性。烘烤中硝酸纤维素膜会变成黄色或褐色并易碎。非特异杂交的背最也会急剧升高。

　　i.将潮湿的膜放在一 张干燥的吸水纸上。

　　ii.将微波炉调至最大功率(750——900W) 对膜加热2——3 min。可直接进行杂交(请参阅方案13)或者将膜干燥后放在若干吸水纸中保存，需要时取出。用微波炉烤硝酸纤维素膜将使Southern杂交的信号减弱，因此不推荐使用(Angeleti et a.1995)90通过紫外照射交联

　　ii.采用254 nm紫外光源照射使DNA交联到膜上。通过紫外照射固定DNA可以很大程度上增强利用某些品牌带正电荷尼龙膜进行杂交实验所获得的信号强度。然而，为了保证最好的效果，避免膜被过量照射非常重要。

　　照射的目的在于使DNA中的一小部分胸腺嘧啶残基与膜表面带正电荷的氨基基团之间形成交联(Church and Gilbert 1984)。

　　过量照射将导致大部分胸腺嘧啶共价结合，从而降低杂交信号。照射时应当确保膜上带有DNA的一面朝向紫外光源。 大部分制造商建议对潮湿的膜照射总量为1.5 Jem',面干燥膜则采用0.15 J/em2的照射剂量。