从细胞遗传学角度看支原体污染的影响

浪浪沙

　　细胞培养不仅在许多实验室用于生物医学研究，而且在工业生产也常用于疫苗、细胞遗传学重组蛋白和单克隆抗体的生产。支原体污染常常给科研与生产带来严重的干扰，但它早期的污染又没有明显的表现，因此没有受到重视。最近，小编看到一篇论文，打算从细胞遗传学角度看看支原体污染的影响。本文为您分析从细胞遗传学角度看支原体污染的影响。

　　这篇文章题目是《支原体污染对动物组织培养中细胞特性的影响》，刊登在1996年第1期的《上海农业学报》上。作者采用的是猪肾传代细胞系IB-RS-2细胞，这是之前常用作疫苗生产的细胞。M199培养基，加小牛血清和水解乳蛋白用于该细胞的培养。作者用已知感染过精氨酸支原体的小牛血清来培养IB-RS-2细胞，把它作为天然感染组。把精氨酸支原体直接加入到培养液中，把它作为人工感染组，并进行了电镜及染色体的观察。

　　结果支原体污染造成的影响有如下：

　　1、细胞形态的变化：主要表现为细胞界限模糊，胞浆颗粒增多，有的细胞甚至失去了原来的形态而发生皱缩，有的细胞从瓶壁上脱落。

　　2、染色体的变化：作者进行了染色体检查，发现一个核内有多个染色单体断裂、易位、双着丝粒和多倍体核型，畸变率达25%。

　　3、pH的影响：支原体污染的细胞培养物在接种后84小时后，也没有明显的pH变化，而无污染的对照组因细胞产酸而发生pH值明显降低，从起始的pH值7.6变为6.8。

　　4、病毒滴度下降：作者观察了病毒在支原体污染的细胞中增殖所受到的影响，结果发现，病毒滴度下降了10倍以上。

　　因此，早期开展支原体检测和预防，对于保证正常的工业生产和科研，都是非常必要的。

　　通常，如果怀疑细胞有支原体污染，可直接取细胞上清进行支原体PCR检测。因为存在支原体污染的细胞上清中，支原体密度为通常为106-108个/ml，已足以用于PCR检测。

　　有如下几种情况。如细胞培养液中存在抑制PCR的物质，这时就需要提取。细胞培养基中的血清浓度如果超过12%，那么对下游的PCR反应会产生抑制。酚红，对荧光定量PCR的检测也会干扰。这些均可以通过使用支原体DNA提取试剂盒来克服。对于样品类型是细胞团、疫苗、冻存细胞和石蜡包埋的组织，也需要提前提取DNA。另外，如果样品中蛋白含量高于10mg/ml，则先需要用蛋白酶K进行处理。