如何控制细胞培养瓶内胰酶的消化时间

ningxueqin

　　细胞培养涉及到细胞接种、培养、收获等流程，细胞培养瓶内的细胞生长到一定程度就需要收获细胞了，这时候就需要借助胰酶对瓶壁上的细胞进行消化后再收获，但在使用胰酶的过程中一定要控制好消化时间。

　　T75细胞培养瓶

　　胰酶属于异种蛋白酶，可以将细胞膜上和细胞培养瓶结合的蛋白质降解。通过在特定位置上降解蛋白，使蛋白间结合处蛋白降解，细胞由于自身内部细胞骨架张力作用下成为球形，从而使细胞分开。胰酶消化的程度是细胞培养中的一个关键步骤：消化过度细胞碎片增多，黑渣子增多，细胞会成片脱落，严重影响细胞活性，并有部分细胞漂浮，随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性。

　　血清培养基瓶

　　在不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37时，胰酶溶液的作用能力比较强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。

　　T25细胞培养瓶

　　此外，如果是新购买的细胞，可以先用低浓度的胰酶摸索一下消化时间，每隔一分钟观察细胞是否变圆，做好记录。总之，在收获细胞培养瓶内的细胞时一定要控制好胰酶消化时间，这样才能很好的保持细胞的活性。