细胞培养的小知识

ningxueqin

　　一般进实验室都有师兄师姐带着做，他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则，如营养液、细胞瓶的摆放位置；灭菌处理程序；开盖手法；细胞吹**法等等。要学会他们的正确操作，在第一次的时候就要重视。

　　细胞真的很脆弱，最好每天都去看看它，以防止出现培养箱缺水、缺二氧化碳、停电、温度不够等异常现象，也好及时解决这些意外，避免重复实验带来的更大痛苦。

　　细胞培养基过滤，这样即使有一批出了问题，还有一批备用的。像后者一般人可能不容易做到。但这是我血的教训，有一次细胞污染了，全军覆没。当时可后悔没有保种。

　　细胞跟人一样，不同的细胞，培养特性是不一样的。培养过程中要细细体会。不同细胞株使用不同的培养基和血清。

　　平滑肌细胞很活跃，喜欢热闹，2——3 天就好多人口，而且不太爱吃喝，真是最好养的孩子了。内皮细胞和平滑肌细胞性格相近，不过它很不讲卫生，也很邋遢，里面有很多分泌屋，要经常换洗才行。RAW264.7 细胞也很开朗，而且很能吃，要经常喂它，头疼的是细胞很容易活化，培养它的瓶子和环境没有内毒素才好，不过我这个当**很难满足它了。

　　培养前的工作

　　无菌检验等等。

　　玻璃器皿的清洗。对于玻璃器皿（细胞瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等）要先用洗衣粉刷干净（注意死角），然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水冲洗 10 遍，除去残留酸液。瓶子之类，冲洗过程要使劲摇晃。然后在双蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，160℃ 干烤 2 h 待用。

　　试剂配置。细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意 pH 值的调节。

　　无菌检验。主要采用过滤除菌：如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等。有些可以采用高压灭菌：如 PBS、D-Hank's等。

　　试剂分装保存

　　包括营养液、胰酶、血清等。

　　血清特别重要。血清必须贮存于 –20℃，如果一次无法用完一瓶，可将 40——50ml 分装于无菌酸处理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。一般厂商提供的血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。（一般情况下不影响细胞培养）

　　瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃ 冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

　　热灭活是指 56℃，30 分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到 56℃后，将血清放入，待温度升高到 56℃ 后计时，一般 5 分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清（包括不同批次）对细胞的影响。