杆状病毒载体表达系统在基因治疗上的应用

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　　随着人们对杆状病毒研究的不断深入，通过病毒基因组改造使其成为杆状病毒载体表达系统，可广泛应用于蛋白生产。由于杆状病毒不会刺激哺乳动物产生强烈的免疫应答，也不会对它们造成功能性的损伤，这些特性使其成为一种极具应用前景的基因治疗载体，给肿瘤治疗、组织再生和靶向给药等民生领域带**音。

　　稳定细胞系构建是通过exvivo或invivo的方式将功能遗传物质导入细胞从而治疗遗传疾病或后天性疾病的方法，其核心技术之一是获得安全高效的基因转移载体。杆状病毒载体表达是真核细胞系统的一种，因其独特的生物学特性，已经作为一种真核表达载体被广泛应用。美迪西科研人员建立了成熟的杆状病毒-昆虫细胞表达服务平台，提供包括重组杆状病毒制备、重组蛋白及其复合物的表达与纯化服务。

　　杆状病毒载体表达可以在体外和体内转导哺乳动物细胞并获得目的蛋白的高效表达，因此杆状病毒日益显示了其作为非复制型载体在基因治疗中的应用前景，开辟了杆状病毒应用研究的新领域。

　　自从首次报道运用杆状病毒介导的P53基因治疗骨肉瘤依赖，已经有许多利用杆状病毒基因转移技术进行心血管、前列腺、肿瘤、神经系统等疾病的治疗研究。另外还发现重组杆状病毒能够在非肝细胞中表达外源DNA,如人宫颈癌细胞系HeLa、人胚肾细胞系293、中国仓鼠卵巢细胞系CHO、叙利亚仓鼠肾细胞系BHK、非洲绿猴肾细胞系CV21等。

　　1、杆状病毒可以进行稳定细胞系的构建

　　杆状病毒可以用来获得组成性表达目的基因的细胞系，而且研究者们还发现有一个大于12kb的病毒基因组片段一直存在于固定转化的CHO细胞系的核中。进一步的研究表明，杆状病毒基因组的一些小的不连续片段(5——18kb)通过不规则重组，以单一拷贝元件的形式整合到细胞染色体上。

　　腺联病毒(AAV)能将自身基因组定点整合到人19号染色体，因此有研究者将一个由哺乳动物启动子调控的表达框，与AAV基因组负责位点特异整合的关键元件连在一起克隆到杆状病毒。利用此杆状病毒，他们克隆到表达框已经整合到19号染色体特异位点的稳定表达细胞系。