基因编辑技术敲除CHO细胞fut8基因

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　　如何才能快速稳定的生产低岩藻糖基化的抗体？我们通过查阅文献注意到抗体的岩藻糖基化是糖蛋白翻译后修饰的一个普遍过程，核心岩藻糖基化即向N-糖链的核心五糖结构(GlcNAc2Man3)还原端第一个N-乙酰葡糖胺上添加一个α-1,6连接的岩藻糖，而岩藻糖基转移酶Fut8，是唯一一个能催化形成α-1,6岩藻糖苷键的岩藻糖基转移酶。因此，如果能敲除CHO细胞基因组内表达该酶的基因，CHO细胞即可生产理论上无岩藻糖修饰的抗体。

　　据此，我们采用基因编辑技术，敲除了CHO-K1细胞基因组内的两个fut8等位基因。利用敲除fut8基因后的细胞进行瞬时转染表达，并评估抗体的表达量和岩藻糖基化水平。

　　FUT8 细胞系从上述数据我们可以看出，野生型的CHO-K1细胞系通过平台工艺表达的抗体，岩藻糖基化水平在75%以上；通过2FF工艺，岩藻糖基化水平在15%以下；而fut8基因敲除的细胞系Fut8-KO-CHO-K1采用平台工艺表达的抗体其岩藻糖基化水平稳定保持在1.5%以下。从多个不同项目分子，我们可以发现无论是采用2FF工艺，还是用Fut8-KO-CHO-K1细胞，其表达量都明显低于采用平台工艺的CHO-K1细胞的表达量，推测是由于岩藻糖比例降低，影响了细胞内与抗体转录、翻译或者分泌相关的蛋白的活性，从而导致整体表达量降低。从mAb2，mAb3项目我们可以看到，Fut8-KO-CHO-K1细胞的表达水平不低于采用2FF工艺的野生型CHO-K1细胞的表达水平，这可以证明fut8基因的缺失，并未从其它方面影响CHO细胞的生理活动。