活检肠道肿瘤类器官如何培养？

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　在肠道肿瘤类疾病的研究中，人们对于类器官的研究投入了很多的激励，而且也做出了一般的成绩，目前已经可以培养出活检肠道肿瘤类器官，那么这种培养过程是怎么样的呢？下面我们一起来看一看。


　　本发明涉及肿瘤类器官培养的方法，具体是一种活检肠道肿瘤类器官的培养、传代、冻存和复苏方法及其应用。
　　背景技术：
　　在肿瘤研究中，特别是在新型药物的筛选，个体化治疗的评估研究上PDTX模型(人来源肿瘤异种移植于免疫缺陷小鼠模型)取得一定的成效，移植肿瘤也保留了原代肿瘤的分化程度、形态特征、结构特点以及分子生物学基本特性和肿瘤微环境。但是，这种模型也有它的缺陷之处，PDTX模型虽然模拟了原代肿瘤的生物学特性，能为肿瘤的研究提供体内模拟环境，但这种模型的建立毕竟不是完全和原代肿瘤相同，而且成瘤模型时间长，建立模型相对困难，免疫缺陷动物成本高，同时也存在一定的伦理问题。PDTX模型，在肝癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌和神经胶质瘤的研究中均有报道。但我们可以看到，这种肿瘤移植模型的建立是比较困难的，特别是一些肿瘤位置例如消化道肿瘤，因其原位处于消化道腔内，其移植的成活率和成功率都是很低的，因此阻碍了其广泛应用，只限制于某些特殊肿瘤。
　　技术实现要素：
　　本发明所要解决的技术问题是提供一种活检肠道肿瘤类器官的培养、传代、冻存和复苏方法及其应用，以克服现有技术存在的缺陷。
　　本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
　　一种活检肠道肿瘤类器官的培养方法，包括如下步骤：
　　1)取米粒至黄豆大小的活检肿瘤组织并置于冰PBS(penicillin100IU/ml+streptomycin100μg/ml)缓冲液中；
　　2)采用预冷5-10分钟的PBS(penicillin100IU/ml+streptomycin100μg/ml)缓冲液多次冲洗干净活检肿瘤组织；
　　3)无菌切碎肿瘤组织并移入预热至37℃的酶消化液中，震荡消化30-60分钟；
　　4)消化完毕后使用移液枪反复吹打直至肿瘤碎片消失，并以100g-300g转速离心5分钟；
　　5)去除上清，60gx5分钟反复离心多次；
　　6)去除上清，加10ml预冷PBS(penicillin100IU/ml+streptomycin100μg/ml)缓冲液，取10ul显微镜下观察计数隐窝数量，100-300g5分钟离心，去干净上清，以100-300个隐窝/50ulMatrigel比例重悬3D培养类器官。
　　类器官除了在肠道内可以运用之外，其实在武藏的很多其他地方也同样可以运用它能够有效的解决疾病中不能够解决的问题，所以受到了很多医学界的欢迎和认可。