知识分享：质粒提取

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　　现在较常用的质粒提取方法有三种:碱裂解法、煮沸法和去污剂裂解法，前两种方法较为剧烈，适用于较小的质粒（＜15Kb），而去污剂裂解法则比较温合，一般用于分子量较大的质粒（＞15Kb）。

　　质粒DNA是一种最广泛使用的制备质粒DNA的方法。其原理为：染色体DNA远大于质粒DNA，且染色体DNA为线状分子，而质粒为共价闭合环状分子。当pH值为 12.0-12.6，碱性环境中，线性的大分子的染色体DNA完全变性且无法复性，而共价闭环质粒DNA在将PH调至中性后即可恢复其天然构象；在高盐浓度存在的条件下，染色体DNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，而质粒DNA为可溶状态，通过离心可除去大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质，质粒DNA仍在上清中。残留的杂质可以通过酚氯仿处理掉。

　　实验过程

　　1、实验试剂

　　（1）溶液Ⅰ 50mMl 葡萄糖 / 10mMl EDTA / 25mMl Tris-HCl,pH=8.0；

　　（2）溶液Ⅱ 0.2Ml NaOH / 1% SDS；

　　（3）溶液Ⅲ 3Ml 醋酸钾 / 2Ml 醋酸；

　　（4）异丙醇，无水乙醇，75%乙醇应放-20℃冰箱预冷备用；

　　酚氯仿放4℃冰箱预存；

　　（5）摇菌，2-3ml相应抗性的LB培养液，在37℃温度下过夜培养。

　　2、质粒提取

　　（1）菌液12000rcf离心5min，弃掉上清，加入0.2ml溶液I（已加入RNase），充分混匀后，加入0.25ml溶液II，颠倒混匀，室温放置5min，加入0.4ml 溶液III，颠倒混匀后，13000rcf 离心30min。