抗体药物研发高铁血红蛋白（MetHb）测试盒如何正确使用

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　　抗体药物研发高铁血红蛋白（MetHb）测试盒说明书
　　一、实验仪器：试管、微量移液器、旋涡混匀器、可见分光光度计（540、602和630nm）
　　二、适用范围：本试剂盒可测各种动物全血等样本中高铁血红蛋白含量；
　　三、测定意义：体内一氧化氮弥散入血后，很快与氧合血红蛋白结合形成高铁血红蛋白（methemoglobin, MetHb），NO与MetHb变化相关，故全血MetHb检测近年来受到研究的广泛重视。同时血液中高铁血红蛋白含量的测定对接触芳香族氨基、硝基化合物所引起的中毒性疾病的诊断与治疗，有重要的意义。
　　四、试剂组成及配制：
　　A.试剂一：血红蛋白测定浓缩液，1ml X 2支，2—8℃保存。
　　血红蛋白测定应用液的配制：临用前将浓缩液用双蒸水1:99稀释，即100倍稀释，现用现配。配好的试剂2—8℃避光保存，可存放一个月以上。
　　B.试剂二： 高铁血红蛋白测定浓缩液，30ml X 1瓶，2—8℃。
　　高铁血红蛋白测定应用液的配制：  浓缩液：双蒸水=1:9稀释，即10倍稀释，可存放6个月以上。
　　C.试剂三：制作还原血红蛋白曲线用
　　① 白色粉剂 X 1支，2—8 ℃避光保存。
　　② 稀释液，1ml X 1支，2—8 ℃保存。
　　试剂三应用液配制：临用前每支粉剂加入1ml稀释液，现用现配，注意避光。
　　D.试剂四：制作高铁血红蛋白曲线用
　　① 砖红色粉剂 X 1支，2—8℃避光保存。
　　② 稀释液，1ml X 1支，2—8℃保存。
　　试剂四应用液配制：临用前每支粉剂加入1ml稀释液，现用现配，注意避光
　　五、操作过程：
　　1、制备抗凝全血：取全血立即加入到肝素抗凝管内，加盖封口，轻轻颠倒混匀。
　　2、血红蛋白含量的测定：取 0.01ml 全血与 2.5ml 的 100 倍稀释的试剂一应用液（血红蛋白测定应用液），混匀，静置5分钟后，1cm光径，双蒸水调零，540nm处测定各管吸光度值。
　　3、高铁血红蛋白测定： 取0.05ml全血，加入2.5ml的试剂二稀释应用液（即高铁血红蛋白测定应用液），混匀，静置5分钟后，1cm光径，双蒸水调零，测定630nm处及602nm处吸光度值。如果没有双波长的分光光度计则可以先测定各管630nm处吸光度值，然后再测各管602 nm处吸光度值。但一定要注意各管的编号不要弄错。
　　六、计算公式：
　　①、血红蛋白含量的计算：血红蛋白克数/升=540nm处吸光度值×367.7
　　②、高铁血红蛋白百分比计算： MetHb% = （A630nm—r x A602nm）÷（A602nm x（R— r）） ×100%
　　③、高铁血红蛋白含量的计算：高铁血红蛋白克数 /升 = MetHb%×血红蛋白克数/升
　　【注1】 A630即在630nm波长时样本的吸光度值；A602即在602nm波长时样本的吸光度值
　　【注2】 R与r均为常数，R=1.81；r=0.14。（本研究所测定常数）
　　即计算公式可以简化为：
　　①、高铁血红蛋白百分比： MetHb% = （A630nm—0.14×A602nm） ÷（A602nm ×1.67） ×100%
　　②、高铁血红蛋白含量的计算：高铁血红蛋白克数/升 = MetHb%×血红蛋白克数 /升