SARS-CoV-2 LC-MS试剂盒(RUO)助力推动研究进展

知识力量

　　在临床研究中，SARS-CoV-2的检测和定量对于了解SARS-CoV-21的影响及病毒脱落时间延长的意义非常重要2。

　　SARS-CoV-2 LC-MS试剂盒(RUO)能够直接检测和定量SARS-CoV-2核衣壳(NCAP)肽。采用Andrew+移液机器人简化并自动完成样品前处理过程，大幅缩短手动制备时间并减少操作员误差。试剂ACQUITY UPLC I-Class系统搭配ACQUITY Premier色谱柱可以快速分离目标肽(进样周期2.5 min)，与Xevo TQ-XS质谱仪相结合，能够以出色的分析灵敏度、选择性和精密度检测浓度为3 amol/μL的病毒肽(日间精密度≤17.4% CV，日内精密度≤17.1% CV)。该方法在3–50,000 amol/μL范围内呈线性。

　　科学家可以利用UPLC-MS的灵活性和重现性来推动关键的SARS-CoV-2研究，借助SARS-CoV-2 LC-MS试剂盒(RUO)直接检测和定量SARS-CoV-2 NCAP特征肽段，无需扩增目标分析物以进行聚合酶链式反应(PCR)。

　　沃特世SARS-CoV-2 LC-MS试剂盒仅供研究使用(RUO)，不适用于诊断。

　　优势

　　一种临床研究试剂盒，其中所含全部组分有助于直接定量SARS-CoV-2 NCAP肽

　　Andrew+移液机器人可自动完成样品前处理过程，尽可能提高通量并减小误差

　　ACQUITY UPLC I-Class系统搭配Xevo TQ-XS质谱仪有利于缩短运行时间并实现高灵敏度、高选择性分析

　　简介

　　在临床研究中，SARS-CoV-2的检测和定量对于了解SARS-CoV-21的影响及病毒脱落时间延长的意义非常重要2。

　　LC-MS已成功证明可以检测SARS-CoV-2蛋白的胰蛋白酶酶解肽3。 但是，这些研究也强调，由于病毒运输液(VTM)等样品基质所含组分会造成干扰，该技术会受到基质效应的影响，限制了方法的分析灵敏度。因此，为了提高检测水平，需要对样品进行净化和富集4,5。

　　稳定同位素标准和抗多肽抗体捕集(SISCAPA)是一种富集技术，在分析复杂基质中的SARS-CoV-2时具有三项优势：

　　通过样品浓缩并去除抑制目标肽(即胰蛋白酶解肽)MS离子化的干扰物质，提高分析灵敏度

　　通过选择性去除背景干扰(否则将导致色谱运行时间延长)，增加LC-MS样品通量

　　通过净化样品进样，改善LC-MS方法稳定性、延长色谱柱寿命并缩短仪器停机时间

　　SARS-CoV-2 LC-MS启动方法包(RUO)如图1所示，其囊括了定量分析低浓度SARS-CoV-2核衣壳(NCAP)肽所需的所有试剂和消耗品。SARS-CoV-2 LC-MS试剂盒(RUO)中包含的试剂经过预先称重，不同批次间具有重现性，有助于整合SARS-CoV-2临床研究方法，为纵向研究过程中获得的结果提供可信度。

　　SARS-CoV-2 LC-MS启动方法包(RUO)

　　图1.SARS-CoV-2 LC-MS启动方法包(RUO)，适用于通过LC-MS/MS分析SARS-CoV-2 NCAP肽

　　Andrew+移液机器人可简化并自动完成样品前处理过程，大幅缩短手动制备时间并减少操作员误差。OneLab负责控制Andrew+移液机器人，这是一种云端软件，直观易用，有助于跨实验室快速部署自动化方法。

　　SARS-CoV-2 LC-MS试剂盒(RUO)有助于将病毒蛋白定量方法与感染生物标志物结合使用，鉴定潜在的预后生物标志物或考察病毒在研究中的影响。

　　沃特世SARS-CoV-2 LC-MS试剂盒仅供研究使用(RUO)，不适用于诊断。

　　实验

　　使用SARS-CoV-2 LC-MS RUO试剂盒按使用说明(IFU)执行本应用纪要中详述的研究。

　　试剂盒工作流程描述了三(3)种肽的变性、酶解、富集方法以及UPLC-MS/MS分析，这三种肽为：AYNVTQAFGR (AYN)、NPANNAAIVLQLPQGTTLPK (NPA)和ADETQALPQR (ADE)，由SARS-CoV-2 NCAP蛋白衍生而来。样品经变性并酶解处理后生成胰蛋白酶解肽。利用固定在磁珠上的抗多肽抗体选择性捕集三种SARS-CoV-2 NCAP肽及其相关的稳定标记内标，以促进富集过程。清洗多肽，去除未结合的基质/样品干扰物质，这些多肽作为洁净且浓缩的样品洗脱，以供UPLC-MS/MS分析。

　　样品描述

　　使用SARS-CoV-2肽校准品，用病毒运输液(VTM，Liofilchem，意大利)制备浓度范围为3~50000 amol/μL的肽校准品样品，并用VTM制备浓度为3 amol/μL、10 amol/μL、400 amol/μL和25000 amol/μL的质控品(QC)。

　　在Andrew+移液机器人上使用SARS-CoV-2 LC-MS试剂盒(RUO)进行样品前处理。

　　变性：

　　将180 μL校准品和QC样品加入96孔板中。向各样品中加入20 μL变性剂(用于SARS-CoV-2的RapiGest试剂)，振摇样品板。然后将96孔板密封，并在56 ℃下加热15 min。

　　酶解：

　　向每个孔中加入20 μL胰蛋白酶溶液，振摇样品板并置于培养箱或恒温混匀仪中，在37 ℃下处理30 min。为抑制进一步酶解，向每个孔中加入20 μL TLCK溶液，并在室温下混合5 min。加入20 μL稳定同位素标记的(SIL) NCAP肽混合物，混合30 s。

　　富集：

　　将SARS-CoV-2 LC-MS富集套件(RUO)中的30 μL抗体磁珠偶联物加入各样品，其中含有等体积靶向AYN、ADE和NPA肽的磁珠偶联物。充分混匀96孔板以重悬磁珠，继续混合1 h，确保足够混匀，使磁珠在整个过程中保持悬浮状态。然后将96孔板转移到磁板阵列上，放置1 min，然后去除水溶液。向每个孔中加入150 μL清洗缓冲液，混合30 s，转移到磁板阵列上，放置1 min，然后去除清洗溶液。再次重复该清洗步骤。向每个孔中加入50 μL洗脱缓冲液，混合5 min。然后将孔板转移到磁板阵列，放置1 min，将洗脱溶液转移到QuanRecovery 96孔板。先将孔板置于自动进样器磁板上，再进样至UPLC-MS/MS系统。