病原体核酸技术在儿童感染性疾病检测中的发展及应用

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　　分子诊断技术的发展加速推进了儿童感染性疾病病原体核酸检测向高通量、高灵敏度、自动化发展的进程。在临床常用的荧光定量PCR技术之外，多重PCR技术、数字PCR技术、等温扩增技术、微流控芯片的应用使病原体核酸检测在通量和灵敏度上有了显著提升，这些技术配合一体机的使用实现了儿童感染性疾病病原体核酸检测的自动化和高通量化。高通量测序技术可以最大程度获取标本中几乎所有病原体的核酸信息，已逐渐成为临床感染性疾病诊断的重要辅助手段。

　　由于儿童免疫系统发育尚未完善，感染性疾病成为儿童最为常见的疾病，2013年全球有3.26亿5岁以下儿童死于感染性疾病，占所有5岁以下儿童死亡数的50%以上 。病原微生物的早期、快速、准确诊断在感染性疾病的诊断、治疗和预防中起着至关重要的作用。随着近年来分子诊断技术的不断创新，感染性疾病病原体检测技术也取得了快速发展和广泛应用。

　　一、儿童临床病原体核酸检测现状及挑战

　　儿童感染性疾病具有病原微生物多样性、复杂性、载量低等特点。目前，病原学核酸检测主要依赖于PCR技术，尤以荧光定量PCR技术的应用最为广泛。荧光定量PCR技术因其实时定量、闭管检测、特异性强等优点，被广泛应用于细菌、病毒、真菌、支原体、衣原体和病原体耐药基因等临床病原学核酸检测领域。但该技术也存在通量过低、检测灵敏度有限等缺点，不适用于临床多种病原体的同时检测以及特殊低载量病原体样本的检测。同时，国内各级医疗机构感染性PCR实验室自动化程度不高，也限制了该技术进一步的临床应用。自动化、高通量、高灵敏度必然是未来儿童感染性疾病核酸检测的发展方向。